组织采集后,经固定、保存、石蜡包埋、切片、展片、烤片,方可进行HE染色(或其它化学染料染色)及免疫抗体标记。
以下操作依据组织大小及致密程度而定
1、组织的采集、固定和保存:
可依据实验目的及组织的特点而考虑采用不同的固定和保存方法。此处只介绍实验室常用方法。 采取组织后,4%多聚甲醛(4%PFA)4°C 固定1小时(根据组织大小和致密程度调整固定时间)或过夜,PBS缓冲液洗三次,每次10min至1小时,于30%、50%乙醇中各10 min至1小时,4°C保存于70%乙醇中。
2、组织的包埋、切片、展片及保存:
固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明,52-54°C石蜡包埋,常规切片,切片厚4 -10mm,贴于处理过的干净载玻片上,34°C烤片过夜,之后收集于载片盒中,4°C密封保存。
石蜡包埋: